本公司提供人腦微血管內(nèi)皮細胞 1000產(chǎn)品訂購。上海拜力生化試劑網(wǎng)主營ATCC細胞、ATCC細胞株、ATCC細胞系,凍存復蘇細胞皆有，所供細胞成活率高。如果您需要訂購細胞產(chǎn)品，請與我們，我們將在12小時內(nèi)給您回復。

冷凍細胞操作步驟：

1．收集對數(shù)生長期細胞；
2．以25μl臺盼藍溶液稀釋25μl細胞懸液；用血球計數(shù)板計數(shù)并計算細胞存活率（至少應該在90%以上）；
3．細胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘；
4．將沉淀的細胞重新懸浮在冷凍液中（大約5?06細胞/0.5 ml 冷凍液）；
5．將細胞懸液加入到冷凍管中，每管0.5 ml；
6．將冷凍管置于-80℃冰箱中；
7．24小時后，將冷凍管移入液氮罐中；
8．在記錄本或電腦中記錄下每一個冷凍管的位置以確保在以后應用時能夠找到每一個冷凍管。

細胞復蘇操作步驟：
1．將冷凍管迅速由液氮轉入到37℃水浴中，冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染，不定時攪拌加速解凍；
2．當細胞*解凍后，用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒；
3．將解凍后細胞轉移到含4℃預平衡培養(yǎng)液的試管中；
4．細胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘；
5．棄上清，將細胞重新懸浮在新鮮培養(yǎng)液中；
6．將細胞轉移到細胞培養(yǎng)瓶，CO2孵箱中培養(yǎng)；
7．是用倒置顯微鏡檢查細胞存活率以及細胞密度，如果細胞密度過高，用培養(yǎng)液稀釋至適宜濃度。

培養(yǎng)條件：
*培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。
培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide（CO2）,5%

傳代方法：
收到細胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。 （一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整 個瓶消毒后放到超菌 臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下 10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼 續(xù)培養(yǎng)。
（二）如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中， 倒轉放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱，然后又 將培養(yǎng)瓶倒轉大約30 秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分 散，輕敲幾下培養(yǎng) 培養(yǎng)瓶，細胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6 傳代；2~3天1次。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細 胞不適應而造成生長不好。
凍存方法：凍存液：基礎培養(yǎng)基 +5%DMSO+20%FBS　
儲存：液氮儲存

拜力提供ATCC 細胞|細胞系|細胞株|腫瘤細胞|細胞|貼壁 細胞|懸浮細胞|,細胞庫管理規(guī)范,提供的細 胞株背景清楚,提供 參考文獻和*培養(yǎng)條件。

本公司所有細胞入庫之前均經(jīng)過嚴格的細胞質(zhì)量檢測和鑒定 ，所有細胞在出庫之前均經(jīng)過一次嚴格的質(zhì)檢認證，確保細胞到 每一位用戶手里都是狀態(tài)。

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